原创《不同贮藏条件下棉花叶片DNA提取效果分析》：该文是关于棉花论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
摘 要：针对棉叶贮藏方法不恰当导致DNA提取得率及纯度较差的问题,本研究以新鲜棉叶为对照,比较了5种贮藏条件下的棉叶DNA提取效果,以期筛选出一种棉叶贮藏的较优模式,从而提高DNA的提取得率及纯度.结果表明,-20℃冷冻3 d的棉叶DNA得率最高且纯度较好,甚至比新鲜叶片的DNA得率高51.4%； 3 d冷冻贮藏的DNA得率明显高于3 d冷鲜贮藏的；7 d液氮冷冻贮藏的DNA得率明显优于7 d硅胶干燥贮藏的和冷冻贮藏的；7 d液氮速冻贮藏的DNA纯度和7 d硅胶干燥贮藏的相近.综上所述,短期贮藏可采用-20℃冷冻保存的方法；较长时间的保存建议采用液氮速冻的贮藏方式.
关键词：贮藏条件；棉叶；DNA提取；纯度；得率
中图分类号：S562+S188 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2015）08-0011-03
Abstract This study was conducted based on the problems that inappropriate storage could lead to poor extraction rate and purity of DNA from cotton leaves. With the fresh leaves as control, the DNA extraction effects of cotton leaves were compared after storage in five kinds of conditions to screen out a best storage method. The results showed that the DNA extraction rate of cotton leaves was the highest after -20℃ frozen storage for 3 days with better purity, which increased by 51.4% compared to that of the control. The DNA yield of 3-day frozen storage was obviously higher than that of 3-day 4℃ storage, and the 7-day liquid nitrogen frozen had clear advantages over the silica gel dry storage and 7-day frozen storage. The DNA purity of 7-day liquid nitrogen frozen was close to that of 7-day silica gel dry storage. In conclusion, -20℃ frozen storage could be used for short-term storage, while the liquid nitrogen frozen could be used for longer-time storage.
Key words Storage condition； Cotton leaves； DNA extraction； Purity； Extraction rate
近年来, 分子生物技术在棉花育种上的应用,使棉花在抗性、产量及品质改良等方面均取得了较大进展.但棉花组织中富含酚类及多糖类物质,棉叶总DNA的提取较为困难,若采集的鲜叶样品保存不当,将严重影响其DNA的提取纯度及得率,进而影响后续分子工作的开展[1～3].因此,通过实验手段找出满足不同要求的植物叶片贮藏条件,对各项实验的开展具有重要意义.
本研究以棉花新鲜嫩叶为对照,比较了不同贮藏条件对棉叶DNA提取得率及纯度的影响,以期筛选出最佳的棉叶贮藏方法,为今后开展分子生物学和生物技术试验提供技术支持.
1 材料和方法
1.1 试验材料
棉花品种新陆早26号、新陆早36号、新陆早42号、苏K202、辽棉18号,种植于新疆农业大学病圃.
1.2 试剂
A液：1 mol/L Tris-HCl （pH 8.0）,0.5 mol/L EDTA （pH 8.0）,4.5 mol/L NaCl,2% SDS,2% PVP；B液：1 mol/L Tris-HCl （pH 8.0）, 0.5 mol/L EDTA （pH 8.0）, 4.5 mol/L NaCl,10% CTAB； 5 mol/L醋酸钾溶液,氯仿+异戊醇（V∶V等于24∶1）,异丙醇,无水乙醇,2%β-巯基乙醇.
1.3 样品采集和处理方法
采集花铃期叶宽为 1～2 cm的新鲜嫩叶,置于冰盒在5 min内带回实验室,迅速将每个品种的叶片分成6份并标号,每份约1 200 mg,1号样品直接用于提取棉叶DNA, 2号样品放入普通冰箱（4℃）冷鲜保存3 d,3号、4号样品分别放入普通冰箱（-20℃）冷冻保存3 d和7 d,5号样品放入液氮中（-196℃）保存7 d,6号样品用硅胶干燥保存7 d.每个处理重复3次.
1.4 棉叶DNA提取
采用改良CTAB法提取,主要参照石庆华等[4]的方法,稍加改动.
1号样品取 400 mg洗净,置于研钵中,加入适量液氮,迅速研磨后,小心缓慢移入 2 mL离心管中,加A液（预热至65℃）1 000 μL、β-巯基乙醇 40 μL,放入 65℃恒温水浴锅水浴1 h；取出,加入1/3体积的醋酸钾溶液（5 mol/L）,冰浴 1 h后取出,4℃下12 000 r/min离心10 min, 取上清750 μL,加1/5体积的B液后放入65℃恒温水浴锅中均匀水浴20 min,取出,室温冷却；加入600 μL氯仿+异戊醇（V∶V等于24∶1）轻轻摇晃混合,平衡后12 000 r/min离心5 min；取上清液600 μL,用氯仿+异戊醇再抽提1次；取上清500 μL,加2/3体积的异丙醇,置于-20℃冰箱过夜；次日取出,6 000 r/min离心5 min,弃上清,用70%乙醇洗涤3次,自然风干后,溶于50 μL ddH2O中备用.
棉花论文参考资料：
结论：不同贮藏条件下棉花叶片DNA提取效果分析为关于对写作棉花论文范文与课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文棉花价格多少钱一斤论文开题报告范文和相关文献综述及职称论文参考文献资料下载有帮助。
