原创《塞来昔布对创伤性异位骨化模型大鼠BMP—4影响》：这篇塞来昔布论文范文为免费优秀学术论文范文,可用于相关写作参考。
[摘 要]目的为探究塞来昔布对创伤性异位骨化大鼠模型的BMP-4的影响.方法该研究于2016年5月-2017年4月给予该院建立的创伤性异位骨化模型大鼠予喂食塞来昔布,分别采取喂食2周、6周、10周的不同方案,通过实时定量PCR及western blot实验,检测模型大鼠跟腱组织BMP-4的表达含量.结果塞来昔布处理后大鼠,实时定量PCR及western blot显示：相比于生理盐水处理大鼠,塞来昔布处理大鼠跟腱组织BMP-4的表达明显下调,并且随着塞来昔布处理时间的延长,BMP-4的表达也相应的下调.结论塞来昔布可通过降低大鼠跟腱组织BMP-4的表达以干预异位骨化
[关键词]塞来昔布；异位骨化；BMP-4
[中图分类号]R285 [文献标识码]A [文章编号]1674-0742（2017）10（a）-0018-04
临床上将骨组织以外发生的骨化称为异位骨化（Heterotopic ossification,HO）,其本质是一种以局部纤维组织增生、钙化、化生及伴有异位新骨形成为主要病理特征的非肿瘤反应性病变.主要发病人群为肘关节、髋关节外伤患者,发生后会导致患者出现关节强直、僵硬等症状,关节活动度明显受限,对患者生活和工作造成影响.因此,如何防治异位骨化,已经成为广大相关骨科工作者的重要课题.骨形态发生蛋白（bone nor.phogenetio protein,BMP）是诱导异位骨化的主要活性介质.主要参和骨骼的生长、发育及创伤的修复,其作用的靶细胞是未分化的、有活性的间充质细胞,对肌肉、血管周围间充质细胞具有诱导作用,并能够对软骨细胞和骨细胞进行不可逆性的分化.1965年Urist等发现脱钙的骨基质可以诱导异位骨化的形成,林霖等直接注射BMP-4重组腺病毒在裸鼠肌肉内成功诱导出异位骨化,提示BMP-4和异位骨化的发生关系密切.结合非甾体抗炎药在异位骨化治疗中扮演的重要角色,以及前期研究发现BMP-4在异位骨化进展中所起的重要作用,该研究于2016年5月-2017年4月给予该院建立的创伤性异位骨化模型大鼠予喂食塞来昔布来治疗,分别采取喂食2、6、10周的不同方案,治疗后观察各组大鼠肢体的皮温、肿胀程度及X线表现,并测定模型大鼠跟腱组织BMP-4的表达及其含量.从而为COX-2选择性抑制剂临床预防HO及使用疗程提供实验基础.
1材料和方法
1.1实验动物
实验动物：选取48只健康雄性wistar大鼠,体重均位于220～240g之间.所有大鼠均购买于山东大学动物实验中心.
1.2主要试剂
美国Gibco公司生产的塞来昔布、美国santa公司生产的多克隆抗体、碧云天公司生产的蛋白酶抑制剂.
1.3实验动物模型制备
将48只sD级体重（100+10）g大鼠,雌雄各半,随机分为6组,每组各10只.右侧为实验组.各组大鼠均建立创伤性异位骨化模型,造模方法：给予大鼠腹腔注射2% 进行麻醉,剂量为80～100mg/kg.麻醉成功后,将大鼠固定在手术台上,对手术区域皮肤进行脱毛,并使用碘伏进行常规消毒,无菌手术刀片沿大鼠右跟腱纵行切开1cm皮肤切口,显露跟腱止点,垂直切口方向横行切断近止点部跟腱,术后全层缝合切口.
1.4大鼠创伤性异位骨化模型的治疗
术后第1天开始给药,第1、3、5组大鼠均予塞来昔布10mg/（kg·d）喂食,第1组喂食2周,第3组喂食6周,第5组喂食10周,第2、4、6组分别喂食2mL生理盐水2周、6周或10周.各組均灌胃1次,d,术后第1周隔天观察1次,1周后每周观察1次.
1.5大鼠创伤性异位骨化模型效果评价
对比各组大鼠术后10周的皮温、肿胀程度,于麻醉状态下拍摄各组大鼠右肢侧位X线片,观察各组大鼠是否有新骨形成.其中鉴于未有指南明确表明,以上指标的评判标准.②该研究拟：皮温取所有实验动物的皮温平均值.肿胀程度：评分范围0～3分,O分为无肿胀,1分为肿胀位于损伤点,2分为肿胀位于膝关节,3分为肿胀位于膝关节以上.新骨形成情况：评分范围0～1分,0分为无新骨形成,1分为有新骨形成.③检测各组大鼠术后10周跟腱组织中骨形态发生蛋白-4（BMP-4）的含量.
1.6骨形态发生蛋白-4（BMP-4）含量检测
分别进行实时定量PCR检测和western blot检测.（1）实时定量PCR检测：研究标本为大鼠跟腱组织,采集大鼠跟腱组织后,加入适量trizo,在零下20%的环境中孵育15min,以1200r/min的速度离心10min,在跟腱组织标本液中加入75%乙醇进行沉淀,使用DEPC水将沉淀物质溶解,放置于零下70%的冰箱中.之后进行总RNA反转录提取和荧光定量PCR反应,反应条件：①温度95%、预变性、时间10min；②温度95%、变性、时间15s；③温度60%、退火、时间30s；④温度72%、延伸、时间30s,共进行40个循环；⑤72℃末次延伸时间为5min.（2）western blot：收集大鼠跟腱组织,提取蛋白,测定浓度（BCA法）,然后取等量蛋白上样电泳,转膜,封闭,加入抗大鼠BNP-4,在4℃条件下孵育过夜,孵育1h后加入二抗山羊抗小鼠IgG,经ECL化学发光显色,内参为GAPDH.最后应用iomad western分析仪自动分析测定蛋白表达量.
1.7统计方法
统计分析软件Graph Pad 6.0.不同组别间采用t检验分析,P<0.05为差异有统计学意义.
2结果
塞来昔布可通过降低大鼠跟腱组织BMP-4的表达以干预异位骨化.
进一步为探究塞来昔布可明显干预大鼠异位性骨化的具体机制,检测了塞来昔布及生理盐水处理大鼠异位骨化模型中跟腱组织中,和异位骨化显著相关分子BMP-4的表达.在mRNA水平上,通过实时定量PCR检测发现：相比于生理盐水处理大鼠,塞来昔布处理大鼠跟腱组织BMP-4的表达明显下调.并且随着塞来昔布处理时间的延长,BMP-4的表达也相应的下调.为进一步确认BMP-4在塞来昔布影响异位骨化中的作用,我们采用western blot实验,从蛋白角度出发,结果同样显示：比于生理盐水处理大鼠,塞来昔布处理大鼠跟腱组织BMP-4的表达明显下调,并且随着塞来昔布处理时间的延长,BMP-4的表达也相应的下调.由上述内容可知,塞来昔布会导致大鼠跟腱组织中的BMP-4的表达含量减少,影响异位骨化的形成.
塞来昔布论文参考资料：
结论：塞来昔布对创伤性异位骨化模型大鼠BMP—4影响为关于塞来昔布方面的论文题目、论文提纲、塞来昔布胶囊副作用论文开题报告、文献综述、参考文献的相关大学硕士和本科毕业论文。
