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关于分子生物学论文范文资料 与分子生物学方法鉴定药用贝母有关论文参考文献

版权:原创标记原创 主题:分子生物学范文 科目:硕士论文 2024-01-07

《分子生物学方法鉴定药用贝母》:此文是一篇分子生物学论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。

贝母我国中药材之中是一种常见的品类,其药用历史非常悠久,在当前任然属于非常贵重的中药材.目前,我国以及发现的贝母属以及其变种植物有超过五十种之多,分布地域也及其广泛,随着中药材的商品价值不断提升,有许多诸如土贝母之类的伪劣品也在市场上大量出现.药用贝母从其形态上去看差别非常细微,但是其化学成分和药用价值的差别却是巨大的,所以如何有效的鉴定药用贝母一直以来都是一项重要的研究课题.近年来,对于分子生物学技术的研究取得了长足的进步,其在中药材鉴定领域的应用也正在变得越来越广泛,本文采用PC-RFLP技术对贝母样品进行了分子鉴定研究.

药用贝母及其鉴定现状介绍

贝母是我国中医学之中常用的贵重药材之一,其本身是指百合科贝母属多种植物的鳞茎,味苦性寒,具备化痰止咳、清热散结以及润肺等多种药用功能,在咳嗽痰热类的多种病症治疗中有广泛的应用.目前我国药典中收载的药用贝母为百合科贝母属9种植物:浙贝母、平贝母、伊犁贝母、新疆贝母、川贝母、湖北贝母、暗紫贝母、梭砂贝母、甘肃贝母的新鲜或干燥鳞茎.由于我国贝母产地众多,且形态差异不大,所以在鉴定方面一直存在一定的问题,对药用贝母的临床应用安全性有很大影响.在我国对于中药材的鉴定长期采用性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等几种方法,但是这些传统的鉴定的方法在当前已经不能满足中药发展的要求,分子生物学的发展为药用贝母的鉴定带来全新的局面.分子生物学鉴定方法的应用使得鉴定手段越来越丰富,把中药鉴定从形态扩展到了DNA,这就大大提高了药用贝母鉴定的效率,增强了其临床应用的安全性.

资料和方法

试剂.除限制性内切酶HinfI、BcnI和Psp1406I;lmol/L的Tris-HCI(12.1g Tris-Base溶于800ml水中,加入浓HCI用酸度计调节pH至8.0,加水定容至IL);O.5mol/L的EDAT(186.1g乙二胺四乙酸二钠溶于700ml水中,用10mol/L Na0H调节pH8.0,加水定容至IL,高温灭菌后备用);10*TBE(108g Tris-Base溶于800ml水中,加入55g硼酸和40ml o.5mol/L EDAT,pH8.0,加水定容至IL);凝胶载样缓冲液(含50%甘油,0.25%澳酚蓝,4℃保存);O.5mg/ml溴乙锭(EB)工作液(加入凝胶的终浓度为o.5ug/ml).

方法.将各种贝母的5s区的PCR扩增产物,分别以Bcnl、HinfI和Psp1406I限制性内切酶水解(37℃,4小时),随后65℃变性处理10分钟以终止反应,取出在2%的琼脂凝胶上电泳,上样量为每个样品8uL.Hinfl酶切体系:20uL反应体系中含有10xBuffer 2uL,HinfI0.5uL(10u/uL),模板溶液6uL,超纯无菌水适量(补足20ul);BcnI酶切体系:20uL反应体系中含有10xBuffer2uL,BcnI0.6uL(10u/uL),模板溶液6uL,超纯无菌水适量(补足20ul);Pspl406I酶切体系:20uL反应体系中含有10xBuffer 2uL,Psp1406I1.2ul(10u/uL),模板溶液6uL,超纯无菌水适量(补足20ul).

结果

根据各贝母的5s区测序结果,找出了暗紫贝母有而其它贝母无的位点(在5’端316bp),用PirmeirPmer5.0软件筛选出BcnI,并用该软件确定其它贝母的5s区全序列均无此酶切位点,因此理想的酶切结果应为:暗紫贝母的5S区PCR产物被切成316bp和370bp两段,其它贝母仍保留700bp左右的原长度,这主要是因为5SrDNA在细胞中以高度重复排列的方式存在,虽然由于同步进化的力量,这些重复单位间已接近纯合,但父母本的差异以及环境因素的影响仍能导致杂交现象的产生(即各拷贝之间存在着少许差异),因此在实际酶切时,仍有少部分PCR产物不能切开,而非酶切不完全的缘故(研究证明将酶量加大,酶切时间延长后电泳结果均无变化).此外,根据湖北贝母在3’184bp处的特异位点选择出Psp1406I,该酶在其它贝母的5s区均无酶切位点.

同样根据各贝母的5s区测序结果,找出了梭砂贝母在5’端278bp处的特异位点,用Pirmepirmer5.o软件筛选出HinfI,并用该软件在各种贝母(包括梭砂贝母)5s区全序列中寻找有无该酶切位点,结果表明:梭砂贝母、浙贝母、蒲忻贝母、甘肃贝母、暗紫贝母分别在5’端49和275、615、615、624、616bp处均有该酶的酶切位点,理想的酶切结果应为酶切后梭砂贝母为49bp、229bp、407bp三条带;浙贝母为615bp和58bp两条带;蒲沂贝母为615bp和58bp两条带;甘肃贝母为624bp和58bp两条带:暗紫贝母为616bp和58bp两条带.所有被切后50bp左右的小片段在电泳图上都几乎看不见,这主要是由于小分子量的DN 段在电泳的过程中易发生扩散,梭砂贝母被HinfI酶切后具有特异性的酶切图谱,且该法在药材的鉴定上也很稳定.

讨论

在贝母属的众多植物当中,川贝母是我们日常生活中最为常见的一种中药材,其对治疗咳嗽疾患有非常好的治疗效果.近年来,随着人们对中药材需求量的日益增加,川贝母由于生长的速度十分的缓慢,并且对生长的条件要求也十分苛刻,所以其野生资源的数量是远远不能够满足临床应用需求的,现已被国家列入了保护药材物种.以川贝母入药去治疗咳喘疾病,在我国有着悠久的历史,久而久之人们便认为川贝母是质量上乘的药材,再加上近年来市场需求量的增加,现在的川贝母价格十分昂贵,因此,市场上有大量以次充好的伪品出现,其中以浙贝母幼小鳞茎去冒充的最多.而从以上的鉴定研究可以看到,不同品类的贝母之间存在非常大的差异,其药用价值也必然是完全不一样的,浙贝母的毒性就远远高于川贝母,所以在临川应用的过程中,其治疗效果自然是会有天壤之别的.对于药用贝母的正确鉴定不仅仅只是关系患者的利益,对于我国中医药学的整体进步和发展也有着非常重要的积极作用.

分子生物学论文参考资料:

细胞生物学论文

生物学教学杂志

医学生物学论文

生物学教学期刊

分子生物学论文

医学分子生物学杂志

结论:分子生物学方法鉴定药用贝母为适合不知如何写分子生物学方面的相关专业大学硕士和本科毕业论文以及关于分子生物学大学排名论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料下载。

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