原创《牦牛脑中磷脂含量测定提取》：本论文为免费优秀的关于磷脂论文范文资料，可用于相关论文写作参考。
摘 要：磷脂是一种生命基础物质,本文采用磷钼酸法测定牦牛脑中磷脂含量,并对提取工艺进行了分析讨论.
关键词：磷脂；测定；提取
磷脂在食品、化妆品、医药等行业中有广泛的应用[1],对其生物学功能的研究,国内外学者做了大量的工作[2,3].关于提取与纯化,报道多限于利用蛋黄和大豆[4].为进一步开展磷脂的生物学效应研究提供合格的原料,我们以哺乳动物牦牛的脑组织为材料,通过工艺探索、对关键的环节进行了分析讨论,为哺乳动物脑组织的综合利用开辟了一条可行的途径.
1 材料与仪器
1.1 仪器
恒温水浴锅；马福炉；BIO-RAD Win-IRFTS-185傅立叶变换红外光谱仪.
1.2 试剂与材料
磷脂标准品（Sigma）；钼酸钠；石油醚；丙酮；氢氧化钾；硫酸肼；浓硫酸；溴化钾,以上试剂均为分析纯.
2 试验方法
2.1 钼蓝比色法
2.1.1 钼酸钠稀硫酸溶液制备
量取140ml硫酸注入300ml水中,冷却至室温,加12.5g钼酸钠,溶后加水至500ml,摇匀,静置24h备用.
2.1.2 磷标准液制备
准确称取无水磷酸二氢钾0.4391g,加水溶解后,移入1000ml容量瓶中并用水稀释至刻度（含磷0.1mg/ml）,吸取10ml于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度（含磷0.01mg/ml）.
2.1.3 样品制备
取新鲜牦牛脑除去脑膜及凝血块放入组织捣碎机中捣碎,将捣碎的牦牛脑放入索氏提取器中加过量的水提取（除去脑组织中游离的无机磷盐）,然后离心除去上清液,放置冰箱冷藏,备用.
2.1.4 制备被测液
用坩埚称取牦牛脑约10g.加氧化锌2g,先在电炉上加热炭化,然后移入550℃～600℃的马福炉中灼烧至灰分成白色.取出,用热盐酸（1：1）5ml溶解灰分,并加热微沸5min,将溶解液滤入100ml容量瓶中,用热水冲洗坩埚和滤纸,并将滤液冷却至室温,用50g/100ml氢氧化钾溶液中和至出现浑浊,缓缓滴加盐酸使氧化锌全部溶解后,再滴2滴,最后用水稀释至刻度,摇匀.
2.1.5 样液测定
用移液管吸取被测液5ml注入500ml容量瓶中,再从500ml容量瓶中用吸移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中,加0.015g/100ml硫酸联氨8.0ml,加2ml钼酸钠稀硫酸溶液,加塞摇匀,去塞将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10min后,用751分光光度计在波长650nm下测定吸光度.
2.2 磷脂的提取
精密称取剔除脑膜及凝血块的牦牛脑浆15g,加入60ml石油醚,于水浴45℃加热70min后离心取上层清夜置于烧杯中,加丙酮使磷脂沉淀,离心浓缩、干燥得到磷脂产品.
2.3 磷脂的定性分析
2.3.1 红外光谱分析（IR）
取适量的提取物粉末,于KBr中迅速研磨,用傅立叶变换红外光谱仪测定其谱图.
3 讨论
钼蓝比色法测定时,若氧化锌大于2g,灰化溶解后造成含量偏低,并且灰化后加10ml盐酸,残渣无法完全溶解,出现絮状物.若氧化锌小于2g,则不能将样品完全覆盖,灼烧时易将样品溅出.所以综合各因素,确定2g氧化锌为适宜用量[5].供试液显色后应尽快测定,大约静止10min后即进行测定并严格按“平等原则”进行测试,否则因久置会使含量降低.钼蓝比色法是分析含磷有机化合物的经典方法,仪器简单,重现性好,精密度高,由于采取了灼烧消化操作,排除了大多数物质的干扰,使得该法获得了良好的选择性.在本实验中钼蓝法测定是应注意排除无机磷盐的影响,在测定前先将捣碎的牦牛脑浆用水反复提取几次以排除无机磷的影响.关于磷脂的测定方法,文献报道较多.如薄层扫描法[6]、薄层色谱法[7]、红外光谱法[8]、31P核磁共振光谱法等,但所需仪器都很昂贵,目前尚难推广普及.采用钼蓝比色法,方法简单准确,重复性好.目前,磷脂的质量分析主要是通过薄层色谱法和高效液相色谱（HPLC）分离磷脂中的磷脂酰胆碱、磷脂酰胆胺等成分,并对磷脂酰胆碱进行定量[9].HPLC法具有快速、自动化等特点,但试剂及色谱柱昂贵,实验成本相对较高.
4 结论
采用磷钼酸法测定牦牛脑中磷脂含量,并对提取工艺进行了分析讨论.试验结果为,钼蓝比色法测得牦牛脑组织中磷脂含量为7.26%.最佳提取工艺为温度45℃,料液比1：4,时间70min.利用红外光谱对提取物进行表征,证明提取物为磷脂.我国是世界上的畜牧生产大国,畜产品加工中利用的主要是动物的*,却浪费了磷脂含量很高的动物脑组织.本实验的完成为哺乳动物脑组织的综合利用开辟了一条可行的途径.
参考文献：
[1]石煌.食品与发酵[M],1982,4.
[2]Proksch E. Barrioer function regulates epidermal DNA synthesis[J].J Clin Invest,1991,87.
[3]Man M. Fatty acids are required for permeability barrier homeostasis[J].J Clin Invest,1993,92.
[4]张洪飞,等.磺化大豆磷脂的结构和性质研究[J].中国皮革,2004（7）：48-51.
[5]浓海葆.蛋黄油不同炮制品磷脂类成分的分析[J].中成药,1996,18（2）：19.
[6]马辰,段宏瑾.大豆磷脂中磷脂类成分的含量分析[J].中国中药杂志,1999,24（11）：671-672.
[7]许益民.核桃仁和西瓜子仁中磷脂成分的分析[J].营养学报,1992,14（2）：203.
[8]王兴国.磷脂研究的历史和现状[J].中国油脂,1999,24（5）：44-46.
[9]谷克仁.浓缩大豆磷脂的溶剂分提[J].中国油脂,2002,27（1）：32.
磷脂论文参考资料：
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