原创《3种桑蟥基因组DNA提取方法比较》：这篇基因组论文范文为免费优秀学术论文范文,可用于相关写作参考。
摘 要：为了探寻一种高效、稳定、廉价的桑蟥基因组DNA提取方法,通过采用CTAB法、蛋白酶K法和盐析法3种方法研究桑蟥基因组DNA的提取.对提取的DNA进行分光光度值的测定以及COI基因的扩增鉴定.结果表明：3种方法均可以提取基因组DNA,蛋白酶K法和CTAB法DNA获得率优于饱和NaCl法提取的DNA,3种方法提取的DNA都可用于PCR扩增实验.因此,在实际工作中可根据实验目的、条件选取最适合的方法.
关键词：桑蟥;DNA提取;CTAB法;蛋白酶K法;盐析法
中图分类号：S-186文献标志码：A论文编号：2014-0684
Comparison of Three Methods for Genomic DNA Extraction from the Rondotia menciana Moore
Wang Yuting, Wang Taichu, Li Ruixue, Wang Wei
（The Sericultural Research Institute, Anhui Academy of Agricultural Science, Hefei 230061, Anhui, China）
Abstract： To explore an efficient, stable, low-cost DNA extraction method from Rondotia menciana Moore, genomic DNA was extracted using CTAB, protein enzyme K and salting-out method, respectively. The extracted genomic DNA samples of three methods were tested using photometric analysis and COI gene amplification. The results showed that, all the three methods can be used for the total DNA extraction, which are suitable for the PCR amplification, but genome DNA extracted by CTAB method and protein enzyme K method were higher in purity and production, degraded slightly. So we should select the proper method according to the objective and condition in the study.
Key words： Rondotia menciana Moore; DNA Extraction; CTAB Method; Protein Enzyme K Method; Salting-out Method
0 引言
桑蟥（Rondotia menciana Moore）是桑树芽叶的重要害虫之一.鳞翅目、蚕蛾科,别名桑蚕、白蚕、白蟥、松花蚕等.桑蟥分布于安徽、江苏、浙江、山东、河南、河北、山西、陕西、甘肃、湖南、湖北、江西、四川、广东及东北各省.寄主主要为桑树,被侵害的桑树满叶虫孔,蟥茧累累,叶黄如麻,严重影响秋蚕生产,是重要的国际性检疫害虫.
随着分子生物学技术的飞速发展,从DNA水平对昆虫进行物种分类鉴定、遗传多样性分析、探讨系统发育、进一步研究物种起源和进化已成为现代昆虫分子系统学和系统发育学的研究热点[1].而获得高质量的基因组DNA是分子生物学实验的基本需要,是进行分子标记、基因克隆及基因表达研究等下游技术的必要前提.因此寻求简便、快速、有效的DNA提取方法,对于进一步开展分子生物学研究具有十分重要的意义[2].
刘波等[3]用CTAB法成功提取了稻蝗昆虫的干标本和酒精浸泡标本DNA.荣万韬等[4]用蛋白酶K法对单条线虫的基因组进行提取,探寻到一种高效稳定的DNA提取方法.张拓等[5]用比较了4种大豆蚜基因组DNA提取方法,结果证明盐析法能够更快速有效的提取大豆蚜基因组DNA.目前,对于昆虫基因组DNA提取研究较少,仅限于双翅目、直翅目中的一些昆虫[6],关于鳞翅目昆虫基因组DNA提取的研究国内外鲜有报道.笔者采用3种昆虫基因组DNA提取的常用方法,即CTAB法、蛋白酶K法和盐析法稍作改进,以桑蟥为研究材料,通过基因组DNA OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳检测,比较了3种方法提取的基因组DNA的质量,旨在为进一步深入开展其亲缘关系分析、基因组比较、遗传多态性和某些特定基因的标记等分子生物学研究提供一定的基础资料.
1 材料和方法
选用3种不同方法从桑蟥幼虫中提取基因组DNA,并经琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增产物电泳来检测提取的DNA的纯度和浓度.
1.1 材料
桑蟥,2013—2014年间采集于安徽省农业科学院蚕桑研究所的桑园内,经专家鉴定后用95%乙醇浸泡,放置于-20℃冰箱中保存.
1.2 桑蟥基因组DNA抽提方法
1.2.1 CTAB法 参照刘佳妮等[7]的方法,稍加改进.
（1）将单头桑蟥幼虫置于1.5 mL离心管中,加入400 ?L 2% CTAB提取缓冲液（0.1 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）,0.02 mol/L EDTA,1.4 mol/L NaCl,2% CTAB）,-20℃放置10 min.充分研磨, 匀浆;（2）65℃水浴2 h,其间轻轻混匀2次,4℃ 10000 r/min离心15 min;（3）取上清液,加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）抽提,混匀,10000 r/min离心10 min,取上清,反复抽提2次;（4）75%乙醇漂洗沉淀2次,无水乙醇漂洗,室温干燥,使乙醇挥发干净.（5）加入30 μL灭菌ddH2O,充分溶解后于-20℃保存备用.
基因组论文参考资料：
结论：3种桑蟥基因组DNA提取方法比较为适合基因组论文写作的大学硕士及相关本科毕业论文，相关什么是基因组开题报告范文和学术职称论文参考文献下载。
