原创《洁净室沉降菌监测影响因素分析》：本文关于洁净室论文范文,可以做为相关论文参考文献,与写作提纲思路参考。
[摘 要] 目的 对洁净室沉降菌监测中可能影响微生物生长的各种因素进行试验分析,找出一种行之有效的操作方法.方法 按《中国药典》2015年版四部9205要求对洁净室沉降菌进行监测.结果 培养方式、培养基的量、沉降碟暴露时间、沉降碟放置位置对最终监测结果均有一定影响.结论 对洁净室进行沉降菌监测时应综合考虑各种因素的影响,以得到最客观的监测结果.
[关键词] 洁净室；沉降菌；影响因素
[中图分类号] R155.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）06（b）-0045-04
药品洁净实验室应定期进行微生物检测,内容包括非生物活性的空气悬浮粒子数和有生物活性微生物监测,其中微生物监测包括环境浮游菌和沉降菌监测[1].沉降菌监测不需要特殊仪器设备,方便、简单,可操作性强,是实验室和生产厂家采用得最多的方法.沉降菌监测照《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行[2].微生物检测结果的可靠性在很大程度还依赖于操作者的技术及掌握熟练程度.因此,按系统控制风险的原理,在充分控制好各环节操作的前提下,培养基的制备就突出为影响检测结果的重要因素.目前市售的成品培养基基本用量在16 mL左右,培养时间大于3 d时普遍存在失水情况,影响检测结果的真实可信度.实验室用培养基多为自配使用的原因也正在于此,但据观察发现,因受实验室条件的限制,实验室人员在自制培养基时的随意较大,体现在取粉量和加水量的多少、还有加热时间和加热温度的不确定性、使用量的不均匀等影响因素.该文也是基于对自制培养基过程中风险因素的可控考虑,从配制用水所致的含水量高低、注入皿内培养基的基体用量等对培养生检测结果有影响的因素出发,以验证控制培养基配制条件的必要性.
1 仪器、设备和材料
1.1 仪器
全自动数显恒温鼓风干燥箱（GZX-9246MBE）；全自动数显生化培养箱（SPX-250B-Z）；全自动数显立式蒸汽灭菌器（YXQ.SJ41.280）；生物安全柜（BHC-1300ⅡA2型）；灭菌刻度吸管、试管、Q 90 mm×15 mm培养皿等.
1.2 设备
标准洁净室,T：18～26℃,RH：45%～65%.
1.3 培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基,批号20160121；胰酪大豆胨液体培养基,批号20160208；沙氏葡萄糖琼脂培养基,批号20160118；沙氏葡萄糖琼液体养基,批号20160302）.所有制备好的培养基均照《中国药典》2015年版（四部）1421“灭菌法”[1]操作,在121℃灭菌20 min.
1.4 验证试验用菌种
金 葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）（10104）]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）（63501）]、白色念珠菌[CMCC（F）（98001）]、黑曲霉菌[CMCC（F）（98003）]（贵州省食品药品检验所）.所有实验用菌种均为第三代.
2 方法
2.1 菌液制备
取经30～35℃培养18～24 h的金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养基培养物1 mL分别加至9 mL 0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释成相应浓度且含菌数小于100 cfu/mL的菌悬液备用.
取经20～25℃培养2～3 d的白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养基培养物1 mL ,加入9 mL 0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释至相应浓度且含菌数小于100 cfu/mL 的菌悬液备用.
取经20～25℃培养5～7 d的黑曲霉菌的沙氏葡萄糖琼脂培养物,加2 mL 0.9%无菌氯化鈉溶液,洗下孢子,转移至另一空管,取1 mL 加至9 mL 0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释成相应浓度且含孢子数小于100 cfu/mL 的孢子悬液备用.菌液计数结果见表1.
2.2 方法验证
培养基适用性检查：每次均以两个平皿在操作台暴露4 h作为阴性对照.比值计算公式：
2.2.1培养基失重情况考察（单位：g） ①取制备好的胰酪大豆胨琼脂培养基沉降碟（培养基量30 mL）先在30～35℃常规预培养48 h后在洁净室动态环境下暴露4 h,再依法培养.结果见表2.
②取制备好的胰酪大豆胨琼脂培养基沉降碟（培养基量30 mL）以双层透明无菌袋包装烫封后先在30～35℃预培养48 h后,在洁净室动态环境下暴露4 h,再依法培养.结果见表3.
2.2.2培养基量对微生物生长的影响 依法制备胰酪大豆胨琼脂培养基沉降碟45个（培养基加入量分别为：20、30、40 mL各15个）,以双层透明无菌袋包装烫封后在30～35℃培养48 h,无菌生长.在洁净室操作台均匀放置,动态暴露4 h后,取不同培养基量的沉降碟分为5组分别接种.接种金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液的,于30～35℃培养2 d；接种白色念珠菌、黑曲霉菌液的,于20～25℃培养5 d.点计菌落数,取平均值计算比值.结果见表4.
2.2.3暴露时间对微生物生长的影响 依法制备胰酪大豆胨琼脂培养基沉降碟60个（培养基加入量30 mL）以双层透明无菌袋包装烫封后在30～35℃培养48 h,无菌生长.分成4组,每组15个,在洁净室操作台均匀放置,动态暴露时间分布为1、2、3、4 h,取不同暴露时间的沉降碟分为5组分别接种.接种金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液的,于30～35℃培养2 d；接种白色念珠菌、黑曲霉菌菌液的,于20～25℃培养5 d.点计菌落数,取平均值计算比值.结果见表5.
2.2.4培养方式对微生物生长的影响 ①培养方式1：常规培养.依法制备胰酪大豆胨琼脂培养基沉降碟15个（培养基加入量30 mL）以双层透明无菌袋包装烫封后在30～35℃培养48 h,无菌生长.在洁净室操作台均匀放置,动态暴露4 h后,分为5组分别接种.接种金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液的,于30～35℃培养2 d；接种白色念珠菌、黑曲霉菌菌液的,于20～25℃培养5 d.点计菌落数,取平均值计算比值.结果见表6.
洁净室论文参考资料：
结论：洁净室沉降菌监测影响因素分析为关于本文可作为相关专业洁净室论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文洁净室的概念论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
