原创《闽茄5号其近缘新组合SRAP鉴定》：本论文为您写SRAP毕业论文范文和职称论文提供相关论文参考文献，可免费下载。
摘 要：利用SRAP分子标记技术,对闽茄5号及其亲本材料、新组合（06-29×06-16）及其亲本材料的DNA特异型条带进行分析研究,经过多次重复试验,从100对引物组合中筛选出1对引物（Em2/Me5）能扩增出闽茄5号及其父本的多态性条带；1对引物（Em3/Me3）能扩增出新组合（06-29×06-16）及其父本的多态性条带.说明该方法重复性好、准确性高的优点,可用于茄子近缘品种间的检测.
关键词：闽茄5号；茄子；SRAP；分子标记
中图分类号：S641.1 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2017）20-0050-03
茄子（Solanum melongena L.）为茄科茄属植物,是世界上热带和温带地区重要的蔬菜,含有多种维生素、脂肪、糖以及矿物质等,特别是富含维生素P,具有许多药用价值,是一种很好的保健蔬菜.闽茄5号是福州市蔬菜科学研究所选育的优良茄子新品种,其母本为中晚熟类型06-29,父本为中熟类型06-13.闽茄5号属中熟类型,较耐低温弱光,始花节位10～11节,果形直,果色紫红,果肉白,抗病性强 [1].2015年通过福建省非主要农作物认定,已在生产上大面积推广.新组合（06-29×06-16）的母本和闽茄5号相同,父本为早熟类型06-16,在制种时容易发生混杂.种子纯度是种子质量的重要内容,也是农民增收的重要保证.因此,试验以闽茄5号及其亲本和新组合（06-29×06-16）及其亲本作为材料,通过SRAP分子标记技术,建立闽茄5号及新组合（06-29×06-16）DNA指纹图谱,在提高种子质量、纯度检测及生产推广方面提供科学依据.
1 材料和方法
1.1 试验材料
闽茄5号及其父本1、新组合（06-29×06-16）及其父本2和共同的母本均由福州市蔬菜科学研究所茄子课题组提供.采用穴盘育苗,待幼苗长到2～3片真叶时取嫩叶提取DNA备用.SRAP引物参照Li等[2]的报道进行设计,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,引物序列见表1.dNTPs、Taq DNA酶、Buffer等由 公司生产.
1.2 试验方法
①茄子DNA提取 随机选取各样本10株,剪取刚展开的新鲜茄子嫩叶20 g,放至液氮中研磨.采用改良的CTAB法提取茄子总DNA[3],利用紫外分光光度計在260 nm和280 nm下测定OD值,检验DNA的质量和浓度,使用时将DNA稀释到40 ng/L.
②SRAP扩增 选择10条上游引物和10条下游引物,随机配成100对引物组合.25 μL反应体系为：30 ng/μL DNA 模板,2.0 mmol/L MgCl2,
200 μmol/L dNTPs,0.25 μmol/L 引物,0.75 U Taq酶.PCR扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸2 min,5个循环；94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸2 min,35个循环；72℃延伸10 min,4℃保存.
③PCR产物的检测 采用1%的琼脂糖凝胶,恒压120 V电泳35 min.使用EB染色,在凝胶成像系统上观察并拍照保存.
2 结果和分析
2.1 多态性引物的筛选
利用10条上游引物（Me1～Me10）和10条下游引物（Em1～Em10）组成的100对引物组合对供试材料的混合DNA进行扩增筛选.结果表明,大部分SRAP引物均能在250～2 000 bp扩增出条带.选择条带清晰并且条带数目较多的引物组合对闽茄5号、新组合（06-29×06-16）及各自亲本材料进行SRAP扩增.筛选出1对引物组合（Me5/Em2）扩增的闽茄5号谱带表现为偏父型；1对引物组合（Me3/Em3）扩增的新组合（06-29×06-16）谱带表现为偏父型.
2.2 指纹图谱的建立
利用筛选出的具有特异性谱带的引物进行SRAP扩增,经过多次重复试验,结果表明,引物组合Me5/Em2 对闽茄5号扩增在1 200 bp具有偏父性条带（图1）；引物组合Me3/Em3对新组合（06-29×06-16）扩增在460 bp具有偏父性条带（图2）.2对引物组合的扩增产物具有高度稳定性和重复性.
3 小结和讨论
本试验利用SRAP分子标记技术对闽茄5号及新组合进行PCR扩增,经过多次重复试验,筛选出Me5/Em2和Me3/Em3分别对闽茄5号及新组合建立指纹图谱,可以将闽茄5号及新组合很好地区分开.
SRAP标记是显性标记,并且符合孟德尔遗传规律,亲本所具有的特异性带能在杂交F1代的谱带中表现出来[4],因此,通过检测F1代带中是否出现双亲的特异性带,可以对不同品种进行鉴定.在新品种选育过程中,一些优势较强的自交系往往作为母本被重复利用,因而选育出的新组合和原品种之间具有较高的同源性,用分子标记检测种子纯度时不能选择母本的特异型条带,而应以父本的特异型带进行筛选.在制种前也可以利用此图谱作为父本除杂的依据,提高种子质量.
参考文献
[1] 陈继兵,林峰,林文.茄子新品种闽茄5号的选育[J].中国蔬菜,2012（24）：99-100.
[2] Li G, Quiros C F. Sequence-related amplified polymorphism（SRAP）, a new marker system based on a simple PCR reaction： its application to mapping and gene tagging in Brassica[J]. Theor Appl Genet, 2001, 103： 455-461.
[3] 王关林,方宏筠.植物基因工程[M].北京：科学出版社,2002：742-744.
[4] 郭修武,张鹏翔,郭印山,等.应用SRAP分子标记技术鉴定葡萄种间杂交后代[J].分子植物育种,2011（9）：1 389-1 393.
SRAP论文参考资料：
结论：闽茄5号其近缘新组合SRAP鉴定为关于本文可作为SRAP方面的大学硕士与本科毕业论文srap协议论文开题报告范文和职称论文论文写作参考文献下载。
