原创《铜绿假单胞菌S8脂肪酶酶学性质固定化》：这是一篇与脂肪酶论文范文相关的免费优秀学术论文范文资料,为你的论文写作提供参考。
摘 要：以耐甲醇铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）S8为出发菌株,通过摇瓶发酵产脂肪酶,对发酵脂肪酶粗酶液进行酶学性质及固定化研究.结果表明：该脂肪酶反应的最适温度为35℃,最适pH值为7.0,在pH 6.0～8.0酶活较稳定.以硅藻土为载体,采用吸附法,对脂肪酶进行固定,脂肪酶的最佳固定化条件为：载体硅藻土和脂肪酶质量比为10,固定化温度为30℃,缓冲液pH值为7.5,固定化时间为2.5 h.
关键词：铜绿假单胞菌；脂肪酶；酶学性质；固定化
中图分类号：Q936文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）02-0054-04
AbstractThe lipase produced by Pseudomonas aeruginosa S8 through flask fermentation was studied in enzymatic properties and immobilization. The results showed that the optimal reaction temperature and optimum pH value were 35℃ and 7.0 respectively. The enzyme activity was stable at pH 6.0～8.0. The lipase was immoblilized on the carrier diatomite with absorption activity. The optimal immobilizing conditions were the mass ratio of carrier to enzymae as 10, immobilizing for 2.5 hours at 30℃ and pH value as 7.5.
Key wordsPseudomonas aeruginosa； Lipase； Enzymatic properties； Immobilization
近年来,由于煤炭、石油和天然气等能源短缺和环境保护的需要,使得生物柴油作为石化柴油替代能源成为了研究热点1～3.生物柴油是指长链脂肪酸和低碳醇（甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等）组成的脂肪酸酯,具有原料可再生、低排放、易生物降解等优点,是环境友好型燃料.目前商品化的生物柴油主要由化学法生产,即动植物油脂和甲醇在高强度酸或碱催化剂下制备4～6.该方法具有转酯化速度快、转化率高和成本低等优点,但同时该法也存在能耗高、环境污染等缺点.
脂肪酶在非水条件下具有较好的转酯化能力而被用于酶法合成生物柴油的研究.这种方法具有反应条件温和、产物易分离回收、醇用量小、无污染排放、对原料要求低等优点7,8.但在酶法生产生物柴油的过程中,通常用作酯交换反应酰基受体的短链醇（如甲醇）易导致脂肪酶失活,且反应副产物甘油对脂肪酶的活性也有 影响9,10.针对生物酶法合成生物柴油研究中存在的问题,本实验室从山东东营胜利油田长期被油污染的土壤中筛选到一株耐受甲醇产脂肪酶较高的铜绿假单胞菌S8.本研究是在此基础上,以铜绿假单胞菌S8为出发菌株,通过摇瓶发酵法产脂肪酶,对发酵产的脂肪酶粗酶液进行了性质及固定化研究,以期为生物酶法合成生物柴油的应用奠定基础.
1材料和方法
1.1材料
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）S8：本实验室筛选保藏.
发酵培养基（g/L）：葡萄糖8,酵母粉8,花生油 20,（NH4）2SO4 6,MgSO4 ·7H2O 1,KH O4 1,pH 7.0.
1.2方法
1.2.1脂肪酶粗酶液的制备将铜绿假单胞菌S8菌株摇床发酵培养72 h,10 000 r/min离心10 min收集发酵液上清；向上清液中加入硫酸铵至25%饱和度,4℃放置5 h,于4℃下10 000 r/min离心10 min弃沉淀,收集上清液,向上清液中加入硫酸铵至75%饱和度,收集沉淀；用去离子水溶解沉淀,透析处理后获得S8菌株的粗酶液,冷冻干燥后得到脂肪酶粗酶粉.
1.2.2脂肪酶酶活的测定采用经典的聚乙烯醇橄榄油乳化液方法11.酶活力单位定义：在温度为37℃、pH值为7.0的条件下,以每分钟催化脂肪水解产生1 μmol游离脂肪酸所需脂肪酶量为一个脂肪酶活力单位（U）.
1.2.3甲醇耐受性能考察在粗酶液中添加终体积分数为3%甲醇溶剂,置于4℃下6 、12、24、48、72 h后,测定脂肪酶活力.以不加甲醇溶剂的原酶液为对照计算相对酶活.
1.2.4脂肪酶的酶学特性
①脂肪酶最适温度及其热稳定性
其他测定条件不变,分别在20、25、30、35、40、45、50、55、60℃温度下测定脂肪酶活力,以测得的最高酶活为100%,计算各温度下的相对酶活,以确定该酶的最适温度；将脂肪酶在30、35、40、45℃温度下保温,每隔0.5 h测定一次酶活,以未保温处理的酶液酶活力为100%,计算相对酶活,以确定该酶的热稳定性.
②脂肪酶最适pH值及其pH值稳定性
选用邻苯二甲酸氢钾-咪唑（pH 4.2～8.2）缓冲液和甘氨酸-氢氧化钠（pH 8.6～10.6）缓冲液,作为缓冲体系进行脂肪酶活力的测定,以确定该酶的最适pH值；取一定量的粗酶液分别和等体积的不同pH值的缓冲液混匀,调pH值为4.2～10,置于4℃下,存放24 h,然后测定剩余酶活力,以最高酶活力作为100% 计算相对酶活,以确定该酶的pH值稳定性.
1.2.5脂肪酶的固定化
① 硅胶的活化：干硅胶1 g,加入20 mL丙酮和10%（V/V）的硅烷混匀,50℃下磁力搅拌2 h.抽滤,用蒸馏水冲洗3～5次,放入60℃烘箱中干燥2 h.向烘干的硅胶中加入1 mmol/L、pH值为7的磷酸缓冲液20 mL,加入25%的戊二醛2 mL,20℃活化2 h.然后将活化的硅胶抽滤,用蒸馏水洗,60℃烘干2 h12.
脂肪酶论文参考资料：
结论：铜绿假单胞菌S8脂肪酶酶学性质固定化为适合脂肪酶论文写作的大学硕士及相关本科毕业论文，相关脂肪酶可以减肥吗开题报告范文和学术职称论文参考文献下载。
