原创《霜霉病菌诱导大白菜几丁质酶和葡聚糖酶基因表达》：这是一篇与葡聚糖酶论文范文相关的免费优秀学术论文范文资料,为你的论文写作提供参考。
摘 要：以大白菜抗霜霉病菌品种为材料,采用实时定量PCR技术检测接种霜霉病菌（Peronospora parasitica）后几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的表达.结果表明,霜霉病菌接种处理显著诱导了几丁质酶基因在大白菜抗病品种中的表达,但β-1,3-葡聚糖基因的表达却呈现 曲线特点,表明这两种基因可能在大白菜对霜霉病抗性中起到了重要作用.
关键词：大白菜；病程相关蛋白；霜霉病菌；几丁质酶；β-1,3-葡聚糖酶；实时定量PCR
中图分类号：S634.103.4文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）02-0096-04
AbstractThe gene expression of chitinase and β-1,3-glucanase in Chinese cabbage variety resistant to Peronospora parasitica were examined using real-time quantitative PCR （RT-PCR）. The results showed that chitinase gene expression was significantly induced by inoculation treatment, while β-1,3-glucanase gene expression showed a double-peak curve. It indicated that the two genes might play important roles in the resistance of Chinese cabbage to Peronospora parasitica.
Key wordsChinese cabbage； Pathogeneses-related proteins （PRs）； Peronospora parasitica； Chitinase； β-1,3-glucanase； Real-time quantitative PCR （RT-PCR）
霜霉病是大白菜第二大病害,是由病原菌Peronospora parasitica Pers. ex Fr.侵染引起的,春秋两季发生尤为严重,可造成高达90%产量损失1.该病菌生理小种进化非常迅速2,采用常规抗性育种和化学药物防治并不总是有效3～5,因此通过远缘杂交或引入抗性基因成为增强作物对真菌病菌生理小种抗性最有效的方法6.大白菜抗病品种“新烟杂3号”是烟台地区一种重要的对真菌病害具有广谱抗性的材料,其抗性性状已通过杂交转移到其它感病品种,获得了一些对真菌病害表现出不同抗性的近等位基因系,这些材料已成为研究大白菜对霜霉病抗性最好的遗传材料.
植物经过长期进化形成复杂而有效的防御机理以抵抗病原菌侵染,包括结构抗性、生理生化抗性以及分子抗性7.分子抗性即基因抗性,是寄主植物通过抗病基因（R）和感病基因（r）互作而表现出的一种抗病性形式7.抗性基因分为微效基因和主效基因,研究抗性微效基因存在较大困难,因此当前主要研究的是抗性主效基因的鉴定、分离、克隆及表达,在此基础上深入研究抗性基因的功能及其作用机制尤为重要8.在诱导植物抗性基因研究中,主要表达的是防卫素和病程相关蛋白（pathogenesis-related proteins,PRs）基因9.由于PRs的诱导表达和植物系统获得抗性（Systemic acquired resistant,SAR）紧密相关10～12,因此PRs基因的诱导表达和转PRs基因增强植物抗病性成为当前研究热点13～15.在已经获得的11类PRs中,绝大部分具有几丁质酶和葡聚糖酶活性,但不同植物中这些基因受病原菌或外源物质诱导表达的特点却各有不同12,因此病原菌和寄主之间的相互作用机制以及PRs基因和之的关联性和协同性是研究的重点.
本研究将大白菜中两种重要的PRs基因对霜霉病菌的抗性关系进行了研究,以期为未来这两种基因在大白菜抗真菌病害基因工程中的应用奠定理论基础.
1材料和方法
1.1材料
供试材料为大白菜抗病品种“新烟杂3号”,由中国农业大学烟台研究院提供.大白菜种子经0.1% HgCl2消毒后,于人工气候箱在20～25℃、12h/12h光周期、60%相对湿度条件下培养,待幼苗长至4～6片真叶时用于试验.
1.2真菌接种液的制备和接种程序
霜霉病菌（P. parasitica）接种液的制备参照王彦华等16的方法,最终配成1×105个/mL孢子囊悬浮液.处理组每个单株叶片用棉棒涂抹约100 μL的诱导液,对照组用纯水代替.诱导处理后植株需遮光、保湿处理24 h,然后揭掉遮光物,于人工气候箱在20～25℃、12h/12h光周期、相对湿度（85±5）%条件下培养,直至采样结束,每处理重复3个.
1.3实时定量PCR检测P. parasitica诱导几丁质酶和葡聚糖酶基因表达特征
1.3.1引物设计在NCBI网站（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）和GenBank大白菜数据库中选取所需几丁质酶基因、β-1, 3-葡聚糖酶基因,以大白菜肌动蛋白Actin基因为内参,利用Primer 5.0软件进行引物设计,引物序列见表1.
1.3.2总RNA提取和cDNA合成利用Trizol reagent（Invitrogen, 上海）分别提取P. parasitica侵染处理和纯水处理0、6、12、24、36、48、72、96 h 的大白菜叶片,利用逆转录酶将5 μg 总RNA 合成为cDNA.
1.3.3实时定量PCR反应体系和反应程序采用Bio-Rad CFX96 型荧光定量PCR仪检测几丁质酶和葡聚糖酶基因转录表达情况.RT-PCR反应总体系为20 μL（见表2）,具体反应程序为：95℃变性3 min；95℃ 10 s,55.8℃ 30 s,40个循环；95℃ 10 s；53.8℃ 10 s；融解曲线测定从65℃到95℃.每处理重复3次,试验数据分析采用2-△△CT法进行相对表达量分析17.
葡聚糖酶论文参考资料：
结论：霜霉病菌诱导大白菜几丁质酶和葡聚糖酶基因表达为关于本文可作为相关专业葡聚糖酶论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文葡聚糖的作用与功效论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
