原创《雌雄全蝎中蛋白质多糖含量测定和比较》：本论文可用于雌雄全蝎论文范文参考下载，雌雄全蝎相关论文写作参考研究。
摘 要：分别采用考马斯亮蓝法和苯酚-硫酸法测定雌雄全蝎中蛋白质及多糖的含量,研究雌雄全蝎中蛋白质及多糖的含量差异.结果表明：雄蝎中蛋白质和多糖含量分别为83.9 mg/g和3.21 mg/g,雌蝎中蛋白质和多糖含量分别为68.3 mg/g和4.45 mg/g,雄蝎中含有较多的蛋白质,而雌蝎中含有较多的多糖.雌蝎、雄蝎中所含蛋白质及多糖的含量存在差异,预测其药效作用也应有一定区别.
关键词：全蝎；蛋白质；多糖；含量测定；雌雄差异
中图分类号：S865.4+9 文献标识号：A 文章编号：1001—4942（2016）03—0130—03
中药材全蝎Scorpion,为钳蝎科动物东亚钳蝎Buthus martensii Karsch的干燥体.全蝎味辛、性平、有毒、归肝经,具有息风镇痉、通络止痛、攻毒散结的功效.该药被用于药方配伍,在中成药中也有较为广泛的应用.全蝎含有蝎毒、三甲胺、甜菜碱、硫磺酸、棕榈酸、软硬脂酸、胆甾醇及铵盐、卵磷脂等,其中蝎毒为主要有效成分,主要由蛋白质和非蛋白质两部分组成.蝎毒的蛋白质成分主要是一类含有20～80个氨基酸的小分子多肽（通称为蝎毒素）,此外尚含有微量元素钙、镁、铁、铜、锌等.近年研究发现,蝎毒中的活性蛋白质在镇痛、抗凝、抗癫痫等方面有效,不仅可直接杀伤或抑制肿瘤细胞,还能提高机体自身的免疫功能.多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性也相继被发现.因此,全蝎蛋白质、多糖的含量和其药效有着一定关系.
全蝎在实际配伍使用中不区分雌雄,因此对于全蝎中蛋白质及多糖的含量测定并未加以区分.本试验分别测定雌蝎、雄蝎中蛋白质及多糖的含量,探讨研究雌、雄全蝎问是否存在差异,以期为全蝎的使用及进一步研究提供参考.
1材料和方法
1.1材料和试剂
市售7龄活雌蝎及雄蝎,经山东中医药大学生药系李峰教授鉴定为东亚钳蝎.
冷冻干燥机（LGJ-18A,北京四环科学仪器厂有限公司）；超声波清洗器（KQ-500E,昆山市超声仪器有限公司）；台式离心机（TDL80-2B,上海安亭科学仪器厂）；紫外一可见分光光度计（UV 9100B,北京莱伯泰科仪器有限公司）；真空干燥箱[DZF-3（6020B）,上海福玛实验设备有限公司].
牛血清蛋白（BSA,国药集团化学试剂有限公司）；D-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所）；苯酚（天津市秋竹科技开发有限公司）；浓硫酸（莱阳经济技术开发区精细化工厂）；石油醚、三氯甲烷、正丁醇、无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司）.化学试剂均为分析纯,试验用水为蒸馏水.
1.2试验方法
1.2.1全蝎蛋白质及多糖供试品的制备①全蝎冻干粉的制备：将活雌蝎、雄蝎于冷冻干燥箱中冷冻12 h,再分别用高速万能粉碎机粉碎,经冷冻干燥机干燥,得雌蝎、雄蝎冻干粉置冰箱备用.
②全蝎蛋白质供试液的制备：分别精密称取雌蝎、雄蝎冻干粉各2.0 g于锥形瓶中,每次加60mL蒸馏水超声10 min,共超声3次,分别得雌蝎、雄蝎蛋白质供试品溶液.
③全蝎多糖供试液的制备：精密称取雄蝎冻干粉2.0 g,置索氏提取器中,加入100 mL石油醚,加热回流提取4 h进行脱脂处理,弃去石油醚,挥干,药渣置具塞三角瓶中加入60 mL蒸馏水,超声提取30 min,再置90℃水浴中浸提3 h,将提取液离心抽滤,收集滤液,将滤液浓缩至约5mL,加入等体积的sevage液（氯仿：正丁醇等于4：1）.振荡、离心,取水层,再加入等体积的sevage液,重复操作5次以除净蛋白.取水层加入4倍体积的无水乙醇,静置过夜,离心,沉淀用少量无水乙醇洗涤4次,得到沉淀,将沉淀置真空干燥器40℃干燥4 h,得雄蝎多糖粉末.取多糖粉末约5 mg,精密称定,加水溶解,定容于10 mL量瓶中,即得雄蝎多糖供试品溶液.
按相同方法制备雌蝎多糖供试品溶液.1.2.2雌蝎、雄蝎中蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量.精密称取牛血清蛋白50 mg,加水溶解,置250 mL容量瓶中定容至刻度,摇匀,即得牛血清蛋白对照品溶液（0.2mg/mL）.
精密吸取对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL,分别置10 mL具塞试管中,各补加蒸馏水至1.0 mL,然后各加入考马斯亮蓝G-250溶液5.0 mL,摇匀,放置5 min.在595 nm波长处,以第一份溶液为空白,分别测定吸光度.以蛋白质浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线.
精密吸取雌、雄蝎蛋白质供试液各0.1 mL,分别置10 mL具塞试管中,照上述标准曲线测定方法进行供试品溶液吸光度的测定,按回归方程计算蛋白质含量.
1.2.3雌蝎、雄蝎中多糖含量的测定 采用苯酚一硫酸法测定多糖含量.精密称取105%干燥至恒重的无水葡萄糖25 mg,加水溶解,置250 mL容量瓶中定容至刻度,摇匀,即得葡萄糖对照品溶液（0.1 mg/mL）.
精密吸取葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,分别置10 mL具塞试管中,加水补至1.0 mL,后分别加入5%的苯酚溶液1.0mL,混匀.迅速加入浓硫酸5.0 mL,混匀,室温静置20 min.在490 nm波长处,以第一份溶液为空白,测定葡萄糖对照品溶液的吸光度.以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线.
精密吸取雌蝎、雄蝎多糖供试液各1.0 mL,分别置10 mL具塞试管中,照上述标准曲线测定方法进行供试品溶液吸光度的测定,按回归方程计算多糖含量.
2结果和分析
2.1考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
2.1.1蛋白质含量测定的标准曲线 如图1所示,得回归方程A等于37.582C+0.0083（r等于0.9989）,具有良好的线性关系.
雌雄全蝎论文参考资料：
结论：雌雄全蝎中蛋白质多糖含量测定和比较为适合雌雄全蝎论文写作的大学硕士及相关本科毕业论文，相关全蝎人开题报告范文和学术职称论文参考文献下载。
