原创《海南黎药胆木PsbA—trnH—PCR体系建立和优化》：该文是关于PsbA论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
摘 要 为了建立适合黎药胆木的PsbA-trnH-PCR体系来研究不同地理居群胆木遗传多样性,本研究以植物基因组试剂盒法提取胆木基因组DNA为模板,采用单因素实验和正交试验对PsbA-trnH-PCR过程中的关键影响因素进行优化,并对PsbA-trnH-PCR产物进行测序鉴定.结果表明,最佳PsbA-trnH-PCR反应体系（25 μL）为：Taq酶1.0 U,dNTPs 0.4 mmol/L,Mg2+ 0.75 mmol/L,引物0.15 μmol/L,模板20 ng,10×PCR Buffer（不含Mg2+）2.5 μL；采用该最佳体系对胆木基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物,经单向测序获得了胆木PsbA-trnH部分序列；并建立了稳定的PsbA-trnH-PCR体系,为胆木的药材鉴别及其遗传多样性研究奠定了基础.
关键词 胆木；PsbA-trnH-PCR；优化系统；正交设计
中图分类号 R284.1 文献标识码 A
Abstract The study intended to establish a PsbA-trnH-PCR system and provide technical support to study the genetic diversity of Li Nationality medicine Nauclea officinalis Pierre ex Pitard in different geographical populations. High quality genomic DNA of N. officinalis Pierre ex Pitard was extracted by the plant genome kit method. The main factors in the process of PsbA-trnH-PCR were optimized by single factor and orthogonal design experiments, and PsbA-trnH-PCR products were sequenced. The results showed that the optimal PsbA-trnH-PCR reaction system（25 μL）was Taq DNA polymerase 1.0 U, dNTPs 0.4 mmol/L, Mg2+ 0.75 mmol/L, primers 0.15 μmol/L, template DNA 10 ng, 10×PCR Buffer（free Mg2+）2.5 μL. The genomic DNA of N. officinalis was amplified using the optimal PsbA-trnH-PCR system to obtain the amplification products, which were sequenced to obtain PsbA-trnH partial sequences. The stable PsbA-trnH-PCR system was established, and can be used in the identification and genetic diversity of for the study of N. officinalis.
Key words Nauclea officinalis Pierre ex Pitard； PsbA-trnH-PCR； optimization of system； orthogonal design
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.07.020
膽木（Nauclea officinalis Pierre ex Pitard）为茜草科乌檀属植物,入药部位是其干燥茎枝及皮,味苦、寒,具有清热解毒、消肿止痛之功效,我国广西、广东和海南民间常用于治疗感冒发热、肺炎、肠炎、痢疾、湿疹、皮疹和脓疡等疾病,外用治疗痈疖脓肿[1].胆木也是一味黎族同胞常用植物药,收载于《黎药学概论》[2].
2009年,生命条形码联盟植物工作组已经决定将叶绿体psbA-trnH基因片段作为植物DNA条形码鉴别的补充条码[3],其在种间及种下居群间具有进化速率快、变异程度高和区分物种能力较强的特点,适用于药用植物和其近缘种类等较低分类阶元的分子鉴定[4-7],在众多科属中具有较高的鉴定效率[8-11],本课题组于前期研究中也验证了该序列较其他推荐序列在药用植物胆木中有较好的鉴别效果.查阅文献可知,目前有关胆木的研究主要集中在成分[12]以及药理方面[13],在种质研究方面仅见胆木种苗栽培、组织培养[14]和生药学的相关研究[15].本研究主要是优化和建立了胆木PsbA-trnH-PCR体系,为进一步研究胆木种质资源遗传多样性及胆木药材鉴别研究奠定基础.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 样品采集 采集海南不同产地的胆木新鲜叶片,立即用硅胶干燥,用于提取基因组DNA.
1.1.2 试剂 植物基因组DNA提取试剂盒、dNTPs、Taq酶、Mg2+、DL 2000均为天根产品；西班牙琼脂糖；β-巯基乙醇为成都格雷西亚化学技术有限公司产品；GelRed为Biotium公司产品；引物为华大基因合成.
1.1.3 仪器 手提式高压灭菌器（YX-380D-Ⅰ；华泰）、台式高速冷冻离心机（SIGMA；1-14）、核酸蛋白测定仪（Eppendorf；Biophotometer-puls）、PCR仪[博日；TC-96/T/H（a）]、电泳仪（北京六一；DYY-6D）、凝胶成像系统（Tanon；4100）.
PsbA论文参考资料：
结论：海南黎药胆木PsbA—trnH—PCR体系建立和优化为关于PsbA方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关菜鸟必看的ps入门图文论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。
